Миоинозитол и D-хироинозитол - патофизиологическое действие на нутрициальные причины синдрома поликистозных яичников на фоне метаболического ожирения печени

О.А. Громова,¹ Т.Е. Богачева,² И.Ю. Торшин,¹ В.И. Демидов²

¹ Федеральный исследовательский центр «Информатика и управление» Российской академии наук (ул. Вавилова, д. 44, корп. 2, Москва 119334, Россия);
² Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Ивановский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (Шереметевский пр-т, д. 8, Иваново 153012, Россия)

Неалкогольная жировая болезнь печени (НАЖБП) – мультифакторное заболевание печени, которое часто встречается у пациенток с синдромом поликистозных яичников (СПКЯ), сопровождается гормональными нарушениями, хроническим воспалением и осложняется перегрузкой железом. В настоящей работе предложена воспроизводимая модель НАЖБП с полиорганной патологией, вызванной сочетанным приемом избытка насыщенных жиров (пальмовое масло), углеводов (фруктоза) и неорганического железа (сульфат железа) и с гистологическим подтверждением изменений органов. Апробирован подход к терапии такой формы полиорганной патологии с использованием инозитолов (Дикироген). Анализ сложной картины изменения биохимических параметров вследствие приёма Дикирогена указывает на эффективность терапии НАЖБП.
В частности, Дикироген приводил к нормализации абнормально повышенных уровней ферритина, коэффициента насыщения трансферрина железом и железа в сыворотке крови. Дикироген тормозил развитие полиорганной патологии посредством (1) нормализации абнормально повышенных уровней лейкоцитов, (2) нефропротекции (уровни креатинина, возраставшие при воспроизведении модели, восстанавливались практически до исходных), (3) гепатопротекции (нормализация уровней аминотрансфераз и общего белка).
Получены гистологические подтверждения описанных выше результатов биохимических исследований. Таким образом, Дикироген может тормозить прогрессирование полиорганной патологии, характерной для пары «СПКЯ НАЖБП».

Синдром поликистозных яичников (СПКЯ) – эндокринное расстройство, обусловленное как генетическими, так и эпигенетическими факторами. В зависимости от периода жизни женщины клиническая картина, диагностика, лечебная тактика заболевания различна. СПКЯ имеет комплекс репродуктивных, метаболических и психологических особенностей.¹
Метаболическая неалкогольная жировая болезнь печени (НАЖБП) встречается у большинства пациенток с СПКЯ (80-90%). Мета-анализ показал, что СПКЯ значительно повышает риск НАЖБП (О.Ш. 2,93, 95% ДИ 2,38…3,62, p < 0,001).² Коморбидная пара «СПКЯ+НАЖБП» основана на схожих нарушениях метаболизма,³ включая инсулинорезистентность, гипергликемию и гиперандрогению.⁴
При этом, адипоциты влияют на выработку яичниками тестостерона и андростендиона за счет действия различных адипоцитокинов. И наоборот, андрогены участвуют в пролиферации и дифференцировке адипоцитов, стимулируя секрецию адипоцитокинов и способствуя накоплению висцеральной жировой ткани.⁵ Поэтому, одной из ключевых рекомендаций в терапии СПКЯ и НАЖБП у пациенток с избыточной массой тела и ожирением является увеличение физической активности для снижения избыточной массы тела.
Резистентность к инсулину (ИР) - основной фактор патофизиологии пары «СПКЯ+НАЖБП», стимулирующий воспаление висцеральной жировой ткани, гиперсекрецию адипокинов и накопление жира в гепатоцитах. Окислительный стресс, разрушая гепатоциты, усугубляет ИР, формируя хронический воспалительный процесс. ИР и гиперинсулинемия приводят к гиперандрогении, поддерживая воспалительный очаг при СПКЯ в яичниках и в висцеральном жире.⁶
Раннее выявление НАЖБП у молодых женщин с СПКЯ имеет важное значение для своевременного проведения адекватной терапии,² включая нормализацию двигательной активности и диеты. Гиперкалорийное питание молодых женщин репродуктивного возраста 20-45 лет (с повышенным индексом ИМТ и талией более 80 см), в котором высока доля насыщенных жиров пальмового масла и фруктозы, стимулирует развитие ИР, ожирения, атеросклероза, гиперандрогении, способствует формированию ановуляторных циклов и бесплодию.
Питание молодых женщин с НАЖБП перегружено не только жирами/углеводами, но и железом (красное мясо, бесконтрольное длительное употребление ВМК с сульфатом железа, железосодержащие пищевые добавки и др.). Перегрузка железом, приводящая к гемосидерозу (отложение «неперевариваемых» нанодисперсных окислов железа в различных тканях) существенно отягощает НАЖБП, стимулируя усиление хронического воспаления, инсулинорезистентности и гемосидероза не только печени, но и других органов (почек, сердца, мозга). В результате, происходит гибель клеток по пути особого вида апоптоза – ферроптоза: происходит нарушение компартментализации окислов железа с продуктами погибших гепатоцитов, нефроцититов, нейронов в виде осунковавшихся соединительной тканью прослоек гемосидерина в паренхиме этих органов [7]. Санация - удаление, выведение продуктов железа из органов – очень сложная задача для лечения. Если та или иная терапия позволяет вывести железо из органов – это восстанавливает физиологический морфогенез. Однако, лечение хелаторами железа, меди и др. элементов до настоящего времени является крайней мерой лечения, в связи с большим количеством серьезных побочных эффектов и малой эффективностью.⁸
В фармакотерапии пары «СПКЯ+НАЖБП» используются метформин (способствует снижению уровня глюкозы и резистентности к инсулину) и другие инсулиновые сенситайзеры, эстроген-содержащие препараты, урсодезоксихолевая кислота (гепатопротектор), статины, омега-3-полиненасыщенные жирные кислоты обеспечивающие противовоспалительные и антиоксидантные эффекты и ингибирование продукции триглицеридов.⁸ Перспективным направлением гепатопротекции являются применение препаратов на основе миоинозитола (МИ) и D-хироинозитола (ДХИ).
Напомним, что МИ и ДХИ – 2 из 9 изомеров 6-атомного спирта инозитола (циклогексангексаола). Систематический анализ 37000 публикаций по МИ/ДХИ посредством современных методов машинного обучения и анализа данных показал, что инозитол-зависимые белки протеома человека вовлечены в поддержку жизнедеятельности сердечнососудистой системы, иммунитета и структуры соединительной ткани (включая эффекты на поддержание состояния костей, хряща, кожи и процессы заживления ран, роста волос, ногтей), проявляют нейропротекторные, гепато- и нефро-протекторные эффекты.⁹
Будучи молекулами, опосредующими биологические эффекты инсулина, МИ и ДХИ участвуют в углеводном обмене. При этом, фосфопроизводные МИ участвуют в качестве сигнальных молекул в каскаде рецептора инсулина, а молекула ДХИ входит в состав инозитоловых фосфогликанов, участвующих во взаимодействиях рецептора инсулина с другими сигнальными белками. Хемореактомный анализ показал, что МИ в большей степени влияет на гликозилирование и глюкуронидацию белков протеома, биосинтез глюканфосфатных «якорей» мебранных белков, метаболизм ганглиозидов. ДХИ более необходим для переработки аминокислот с разветвленной цепью и для метаболизма других микронутриентов.¹⁰
Пероральный прием препаратов МИ/ДХИ в суммарной дозировке 2..4 г/сут способствует снижению инсулинорезистентности, нормализации липидного профиля, артериального давления, снижению избыточной секреции андрогенов, гирсутизма и акне. Поэтому дотации ДХИ и МИ, способствуя повышению чувствительности клеток к инсулину и устранению гиперандрогении, используются в терапии пациенток с СПКЯ,¹¹ в процессе подготовки к процедуре экстракорпорального оплодотворения,¹² для профилактики врожденных пороков развития (прежде всего, фолат-резистентных).⁸ Следует отметить, что МИ и ДХИ, способствуя снижению избыточной секреции андрогенов, благоприятно воздействуют на состояние кожи, волос и ногтей.¹³
Одним из аспектов участия МИ и ДХИ в реализации эффектов инсулинового рецептора являются гепатопротекторные свойства инозитолов. Уровни МИ оказывают значительное воздействие на функционирование печени, способствуя осуществлению биологических эффектов фактора роста гепатоцитов, профилактируя стеоатогепатит, цирроз печени, стимулируя секрецию желчи.⁹ ДХИ улучшал метаболизм глюкозы у мышей с моделью диабета (линия животных Db/Db), снижая повреждения ткани печени и повышая биосинтез гликогена на фоне активации сигнальных белков инсулинового рецептора IRS2, киназ PI3K и AKT.¹⁴
В модели НАЖБП, воспроизводимой посредством замены воды на 20%-ый раствор фруктозы в течение 8 недель, формировались гипергликемия, гиперинсулинемия, дислипидемия, стеатоз печени и окислительный стресс. ДХИ дозозависимо снижал вызванное избытком фруктозы повышение массы тела, уровня глюкозы в сыворотке крови, уровней инсулина, общего холестерина, триглицеридов, липопротеинов низкой плотности и маркеров дисфункции печени и воспаления (аминотрансферазы, С-реактивный белок и др.).¹⁵ В другом эксперименте, ДХИ снижал стеатоз печени, вызванный диетой с высоким содержанием жиров посредством сигнального пути PKC-IRS/PI3K/AKT,¹⁶ улучшал секрецию желчных кислот и ослаблял холестаз у крыс с перевязкой желчных протоков (повышения экспрессии генов, кодирующих транспортеры желчных кислот BSEP и MRP2, снижения уровней провоспалительного NF-kB и антиоксидантного эффекта).¹⁷
В нашем исследовании изучены взаимосвязь избыточного потребления насыщенных жиров пальмового масла, фруктозы, сульфата железа с развитием НАЖБП и эффекты фармаконутрицевтиков на основе МИ/ДХИ. Фармаконутрицевтик Дикироген содержит МИ и ДХИ в соотношении 5:1, синергидные им фолиевую кислоту и пироглутамат марганца (механизмы синергизма были рассмотрены в работах^18,19 был апробирован на модели полиорганной патологии. Поэтому, первой целью настоящей работы являлось создание биохимически и гистологически подтверждённой модели полиорганной патологии с перегрузкой железом на фоне избыточного потребления пальмового масла и фруктозы. Вторая цель – апробация Дикирогена как средства лечения такой полиорганной патологии.

При разработке модели полиорганной патологии с перегрузкой железом за основу была взята экспериментальная модель НАЖБП, вызванная пальмовым маслом.²⁰ Разработка модели перегрузки печени железом в условиях добавления в диету насыщенных жиров и фруктозы, и апробация эффектов терапии Дикирогена были проведены на 36 белых крысах-самцах массой 300-400г. Исследования проведены согласно решению этического комитета ИвГМУ, протокол № 3 от 01.11.2023.
Животные были разделены на 3 группы. Первая группа (n=6) - интактный контроль (на нормальной диете и питье в виде чистой питьевой воды). Во второй (n=12) и третьей (n=6) группах животных воспроизводилась модель перегрузки печени железом в условиях добавления в диету насыщенных жиров и фруктозы. Для воспроизведения модели особям вводили в/б химически чистое двухвалентное сернокислое железо (пр-во АО «ЛенРеактив», паспорт № 070051-81) в дозе 50 мг/кг/сут в течение 12 сут. Одновременно, в рацион питания добавляли твёрдую фракцию пальмового масла (CandleM, Индонезия) в дозе 30г/кг/сут. Раствор фруктозы (ООО «Компания «Сладкий мир», ТУ 10.86.10-027-72315488-2019) в дозе 1 г/кг/сут использовался вместо питьевой воды в течение 12 сут.
На 13 день исследования животных первой и второй групп, из каждой по (n=6) наркотизировали, проводили забор крови для биохимического исследования и секционного материала (печени, почек, мозг, сердце) для патогистологического исследования. Животные выводились из эксперимента путем достижения наркозной смерти с использованием препарата Золетил. После воспроизведения модели в группах 2 и 3 (т.е. начиная с дня 13 от начала эксперимента) животные переводились на стандартную диету и обычный питьевой режим.
В третьей группе (n=6) принимался инозитол-содержащий витаминно-минеральный комплекс «Дикироген» (пр-во PIZETA PHARMA S.p.A, Италия, содержит МИ и ДХИ в пропорции 5:1) в дозе 400 мг/кг/сут перорально в течение 4 недель. Дикироген, включающий 1000 мг МИ, 200 мг ДХИ, фолиевую кислоту (200 мкг) и пироглутамат марганца (5 мг в расчете на элементный марганец) рекомендован при нарушениях менструального цикла, предменструальном синдроме, гиперандрогении (в т.ч. СПКЯ) у женщин и снижении фертильности у мужчин, также при инсулинорезистентности и для предгравидарной подготовки.
На 41-ый день исследования животных второй и третьей групп (n=6) наркотизировали, проводили забор крови для биохимического исследования и секционного материала (печени, почек, мозг, сердце) для патогистологического исследования. Наблюдения за животными проводились ежедневно; фиксировались общее состояние, аппетит, особенности поведения и др. Стандартными методами в крови определялись более 20 биохимических показателей: показатели общего анализа крови, ферритин, коэффициент насыщения трансферрина железом, железо сыворотки, индексы Mentzer и Sirdah, уровни фолатов, витамина В12, общий белок, аминотрансферазы, креатинин, скорость клубочковой фильтрации, билирубин (общий, прямой).
Материал для гистологического исследования (миокард левого желудочка, правой и левой доли печени, кортикальные отделы правой и левой почек) получали в ходе аутопсии экспериментальных животных, фиксировали в 10%-ом формалине, препарировали, обезвоживали 99%-ым изопропиловым спиртом и парафинировали. На микротоме «Microm» приготовлялись гистологические срезы толщиной 5-6 мкм, окрашивались гематоксилином и эозином; железо окрашивалось по Перльсу (т.н. берлинская лазурь). Микрофотографии получены с помощью исследовательского микроскопа «Micros» МС-200 и цифровой окулярной камеры DCM 900. Морфометрия была осуществлена подсчётом среднего числа купферовских клеток, в цитоплазме которых содержится берлинская лазурь, на одно поле зрения.

В результате проведения описанного комплекса исследований было установлено, что и воспроизведение модели полиорганной патологии с перегрузкой железом, и использованный подход к их коррекции (Дикироген) приводили к сложным изменениям многих биохимических показателей крови. Поэтому, для полноценного описания результатов были использованы особые формы представления данных, развиваемые в топологическом подходе к распознаванию: метрические карты показателей (параметров) исследования.
Метрические карты показателей (параметров) исследования представляют собой отображение всего комплекса взаимодействий параметров, спроецированных на плоскость диаграммы. Каждая точка метрической диаграммы соответствует одному показателю исследования (например, уровням ферритина) в определенный день исследования в определенной группе. Соответственно, метрическая диаграмма позволяет оценивать степень взаимодействия показателей (чем больше коррелируют два показателя/параметра, тем ближе соответствующие точки на диаграмме) и различия между группами.
Для воспроизведения модели (Рис. 1А) характерно движение точек слева направо (соответствует усилению полиорганной патологии: возрастание количества лейкоцитов, тромбоцитов, аминотрансферазы АСТ, АЛТ, нарушения индексов Сирдаха, Ментцера и др.) и сверху вниз (противоположно действию терапии: нарушения уровней эритроцитов, гемоглобина, возрастание железа сыворотки и др.) – т.е. усиление патофизиологии НАЖБП.
Рис. 1 Метрическая диаграмма, отражающая согласованные изменения биохимических показателей. (А) Воспроизведение модели полиорганной патологии. Точками голубоватого цвета обозначены параметры в группе интактных животных, оранжевого цвета - параметры при воспроизведении модели (данные на день 41). (Б) при применении Дикироген. Точками красного цвета обозначены параметры в группе принимавших МИ+ДХИ, оранжевого цвета - параметры при воспроизведении модели.




Применение Дикироген (Рис. 1Б) соответствовало движению точек биохимических показателей справа налево (снижение выраженности полиорганной патологии: нормализация аминотрансфераз АСТ, АЛТ, ферритина, железа сыворотки, билирубина, лейкоцитов, гематокрита, белка и др.) и снизу вверх (положительный эффект применения: нормализация СКФ, количества эритроцитов, индексов Сирдаха/Ментцера и др.). Таким образом, анализ сложной картины изменения параметров позволят утверждать, что приём Дикирогена способствует терапии полиорганной патологии, в т.ч. снижению цитолиза и перегрузки железом.

Показатели обмена железа

Анализ показателей обмена железа (Рис. 2А) указал на формирование перегрузки железом при воспроизведении модели с последующей нормализацией уровней железа в крови. Из профилей очевидно, что значения трёх "быстрых" показателей обмена железа (ферритин, коэффициент насыщения трансферрина железом, железо сыворотки) резко повышались при воспроизведении модели: значения ферритина возрастали от 201±45 мкг/л у интактных контролей до 229±13 мкг/л (модель, д.13, P<0.002) и, далее, до 254±12 мкг/л (модель, день 41, P<0.001). Значения коэффициента насыщения трансферрина железом возрастали от 57±8% (интактные) до 88±15% (д.13, P<0.001) и 81±27% (день 41, P<0.0001). Уровни железа в сыворотке крови увеличивались от 28±5 мкмоль/л (интактные) до 50±10 мкмоль/л на дни 13 и 41 (P<0.001).
Дикироген приводил к достоверному снижению ферритина на день 41 (173±52 мкг/л, P<0.001). Коэффициент насыщения трансферрина железом на день 41 снижался до более низких значений, чем в группе интактных контролей (Дикироген: 36±9%, P<0.005). Аналогичным образом под воздействием Дикирогена нормализовалось абнормально повышенное железо в сыворотке крови (23±5 мкмоль/л, P<0.01).
Рис. 2 Профили биохимических показателей исследованных групп. А) Показатели обмена железа, Б) показатели полиорганной дисфункции.

Биохимические показатели полиорганной дисфункции

Был проведен анализ значений других биохимических показателей (Рис. 2Б), связанных с полиорганной патологией, воспалением, тромбообразованием, дисфункцией почек и печени.
Воспаление. Одним из основных признаков полиорганной дисфункции, в т.ч. при НАЖБП и СПКЯ, является возрастание провоспалительных и протромботических реакций организма. Уровни лейкоцитов у интактных животных составили 4.6±1.3 10^9 кл/л, а при воспроизведении модели повышались, в среднем, на +1.6 10^9 кл/л ко дню 13 (6.2±1.0 10^9 кл/л, P=0.022) с трендом к повышению ко дню 41 (6.9±0.8 10^9 кл/л, P=0.067). Дикироген способствовал нормализации уровней абнормально повышенных лейкоцитов (5.4±0.6 10^9 кл/л на день 41, P=0.0018).
Функция печени. Уровни общего белка в сыворотке крови, аспартатаминотрансферазы (АСТ), аланинаминотрансферазы (АЛТ), билирубина (общего, прямого), фолатов и общего белка. При воспроизведении настоящей модели уровни АСТ, АЛТ, фолатов возрастали, а уровни общего белка - падали.
Уровни АСТ составили 114.9±27.3 Ед/л у интактных животных. При воспроизведении модели в группах 2 и 3 отмечено более чем двухкратное повышение АСТ до 299.9±27.9 Ед/л (P<0.000001) на день 13, без изменений ко дню 41 (301.3±30.3 Ед/л). Дикироген способствовал достижению уровня АСТ как у интактных животных на день 41 (Дикироген 94±35 Ед/л, P<0.0001). Уровни АЛТ изменялись подобным образом: по сравнению с интактными (22.8±3.2 Ед/л) воспроизведение модели приводило к достоверному повышению АЛТ на д. 13 (54.1±9.8 Ед/л, P=0.00014), без изменений ко дню 41 (58.7±5.5 Ед/л). Прием Дикироген (25.8±3.8 Ед/л, P<0.001) стимулировал восстановление АЛТ до уровней, характерных для интактных животных (P>0.1 при сравнении группы с приемом Дикироген и без, 22.8±3.2 Ед/л). Прием Дикироген также способствовал восстановлению уровней общего белка на день 41 (60.7±3.7 г/л, P=0.0001).
Функция почек. Креатинин в сыворотке крови и скорость клубочковой фильтрации (СКФ) являются показателями функционирования почек. При воспроизведении модели креатинин сыворотки крови падал от 35.7±1.2 мкмоль/л у интактных животных до 22.5±2.4 мкмоль/л в модели на день 13 (P<0.00001), без изменений ко дню 41 (23.3±1.4 мкмоль/л). Эффект приема Дикирогена был весьма выражен - уровни креатинина восстанавливались практически до исходных (30.3±5.1 мкмоль/л, P=0.0093), без достоверных отличий от группе интактных животных.
Среднее значение СКФ у интактных животных составило 169±5 мл/мин/1,73м^2, а при воспроизведении модели уменьшалось до 142.4±12.3 мл/мин/1,73м^2 (на день 13, P=0.0011), с частичным улучшением ко дню 41 (154.1±7.1 мл/мин/1,73м^2, P=0.04). Дикироген способствовал выраженному восстановлению значений СКФ: повышению до 176.7±24.8 мл/мин/1,73м^2 (P=0.038), что достоверно выше, чем у интактных животных (P<0.005).

Гистологические подтверждения результатов биохимических исследований

Во всех наблюдениях группы интактных контролей, гистологическая картина ткани печени соответствовала норме. В пределах отдельно взятой печеночной дольки при сохранении гистоархитектоники гепатоциты имели привычную конфигурацию с равномерным распределением ультраструктур в цитоплазме, без образования глыбок «берлинской лазури». Наблюдалась равномерная перфузия синусоидов как в центральной и в перипортальной зонах, в строме портальных трактов присутствовали единичные лимфоциты. Исследование корковой зоны почек показало привычное строение клубочков; головной мозг крыс контрольной группы имел нормальный уровень перфузии.
При воспроизведении модели наблюдалось накопление железосодержащих соединений в пространстве Диссе, цитоплазме гепатоцитов и купферовских клеток перипортальной зоны печеночных долек (рис. 3А). В центральных отделах печеночной дольки гепатоциты содержали мелкие капли липидов (рис. 3Б). Через 41 день от начала эксперимента железосодержащий субстрат в печени перераспределился и активно накапливался в цитоплазме купферовских клеток (рис. 3В) и между соединительнотканными волокнами капсулы печени (рис. 3Г). Наблюдалось прогрессирование жировой дистрофии гепатоцитов с образованием крупных вакуолей с липидами в их цитоплазме (рис. 3Д). В большинстве наблюдений строма портальных трактов имела воспалительно-клеточный инфильтрат, состоящий преимущественно из Т-лимфоцитов и эозинофилов (рис. 3Е, Ж). Гистологическая картина соответствовала средней выраженности воспалительной реакции как ко дню 13, так и ко дню 41 после воспроизведения модели.
Рис. 3. Гистологический анализ тканей печени при воспроизведении модели «сульфат железа + пальмовое масло + раствор фруктозы». Окраска гематоксилином и эозином – слайды Б, Д, Е, Ж; окраска реакцией Перльса – слайды А, В, Г. Слайды Б, В, Г - увеличение х480, слайды А, Д, Е, Ж– увеличение х1200. А) Внутри и внеклеточное отложение глыбок берлинской лазури на периферии печеночной дольки. Б) Мелкокапельное ожирение гепатоцитов центра печеночной дольки. В) Цитоплазма звездчатых ретикулоэндотелиоцитов (купферовских клеток) насыщена берлинской лазурью. Г) Очаговое скопление берлинской лазури в капсуле печени. Д) Крупнокапельное ожирение гепатоцитов центра печеночной дольки. Е) Воспалительно-клеточная инфильтрация стромы портального тракта. Ж) В составе инфильтрата Т-лимфоциты (А), эозинофилы (Б).

Исследование гистологических срезов кортикальной зоны почек к 13-ому дню эксперимента показало накопление мелких «зёрен железа» в цитоплазме нефроцитов проксимальных извитых канальцев, которое носило диффузно-очаговый характер. К 41-ому дню эксперимента наблюдалась активная экскреция железосодержащих соединений, что подтверждается прокрашиванием мочи в просветах дистальных отделов извитых канальцев в синий цвет.
При исследовании головного мозга к 13-ому дню эксперимента на фоне умеренно выраженного периваскулярного и перицеллюлярного отека нервной ткани наблюдалось очаговое накопление железосодержащих веществ в периваскулярном пространстве. В целом, разработанная модель имела достоверное морфологическое подтверждение.

Гистологический анализ эффектов Дикирогена

В группе животных получавших Дикироген на 41-й день после начала эксперимента в печени выявлялись только отдельные центролобулярные очаги жировой дистрофии гепатоцитов. В цитоплазме единичных гепатоцитов определялись мелкие гранулы берлинской лазури (рис. 4А). Реакция Перльса указала на умеренное накопление железосодержащих аддуктов в купферовских клетках и в капсуле печени (Рис. 4Б). В 4-х наблюдениях отмечена слабая воспалительно-клеточная инфильтрация стромы портальных трактов с преобладанием эозинофилов (Рис. 4В).
Рис. 4 Гистологический анализ результатов приема Дикироген на ткани печени. Окраска гематоксилином и эозином – слайды А, В; окраска реакцией Перльса – слайд Б. Слайды Б, В - увеличение х480, слайд А– увеличение х1200. А) Крупнокапельное ожирение гепатоцитов центров долек (метка «А»), железосодержащий субстрат в цитоплазме купферовской клетки (метка «Б»). Б) Берлинская лазурь в купферовских клетках, пространстве Диссе (метка «А»), жировая дистрофия гепатоцитов (метка «Б»). В) Преобладание эозинофильных лейкоцитов в воспалительном инфильтрате стромы портального тракта.


При исследовании почек гранулы берлинской лазури обнаруживались в цитоплазме единичных нефроцитов проксимальных извитых канальцев (рис. 5А), содержимое просветов дистальных канальцев слабо насыщено «зёрнами железа» (рис. 5Б). Только в двух наблюдениях выявлен хронический интерстициальный нефрит (рис. 5В). Реакция Перльса не выявила наличия железосодержащих продуктов в нервной ткани полушарий большого мозга и мозжечка при использовании Дикирогена (рис. 5Г). При проведении реакции Перльса в миокарде небольшие скопления железо-содержащих гранул в цитоплазме кардиомиоцитов периваскулярной зоны (рис. 5Д) обнаружены только в 3 из 6 случаев.
Рис. 5 Гистологический анализ эффектов Дикирогена на ткани почек, мозга и миокарда. Окраска гематоксилином и эозином – слайд В; окраска реакцией Перльса – слайды А, Б, Г, Д. Слайды А, Б, Г - увеличение х480, слайды В, Д – увеличение х1200. А) Берлинская лазурь в нефроцитах проксимальных канальцев. Б) Железосодержащие продукты в нефроцитах и в просветах дистальных канальцев. В) Очаговая лимфоцитарная инфильтрация стромы почки. Г) Умеренно выраженный периваскулярный отек нервной ткани мозжечка при отсутствие железосодержащие продуктов. Д) Кардиомиоциты периваскулярной зоны содержат гранулы берлинской лазури.

Фенотип СПКЯ, сопровождающийся избыточной массой тела, сочетается с полиорганной патологией, в т.ч. с НАЖБП образую патофизиологическую пару «СПКЯ+НАЖБП», которая представляет особые сложности для лечения. Общность патофизиологический путей СПКЯ и НАЖБП позволяет использовать средства для лечения НАЖБП в терапии СПКЯ и наоборот. Тяжесть течения полиорганной патологии в паре «СПКЯ+НАЖБП» возрастает на фоне высокого потребления фруктозы, насыщенных жиров и про-оксидативной перегрузки неорганическим железом. Известно, что использование препаратов на основе миоинозитола и D-хироинозитола при СПКЯ позволяет снижать инсулинорезистентность и восстанавливать баланс андрогенов.
В настоящей работе впервые показано, что фармаконутрицевтик Дикироген (в состав которого входят МИ, ДХИ, фолиевая кислота и пироглутамат марганца) тормозит формирование полиорганной патологии, сопровождающей патофизиологическую пару «СПКЯ+НАЖБП». Следует особенно подчеркнуть положительное влияние Дикирогена на обмен железа, снижение уровней маркёров воспаления (лейкоцитоз, гиперферритинемия и др.), цитолиза (АСТ, АЛТ), нормализацию уровней креатинина и скорости клубочковой фильтрации (что указывает на восстановление детоксикационной функции почек). Гистологические исследования подтвердили, что Дикироген тормозит формирование жировой дистрофии печени, снижает воспаление в печени и почах, восстанавливает морфологию тканей. Торможение инозитолами развития полиорганных поражений, сопровождающих пару «СПКЯ+НАЖБП», важно для восстановления физиологического профиля метаболизма жиров и углеводов, торможения ферроптоза и отложения мелкодисперстных оксилов железа с печени, почках, сердце, мозге, т.е. для оздоровления организма женщины в целом.